Etude du rôle de l’actine corticale dans l’assemblage du VIH-1 dans les lymphocytes T CD4

Résumé du projet

Le VIH-1 s’assemble et bourgeonne au niveau de la membrane plasmique des lymphocytes T CD4+, la cible majeure de ce virus. La formation des particules virales est dû à la poly-protéine virale Gag, qui s’auto-assemble au niveau de la membrane plasmique. Des nanostructures du cytosquelette d’actine ont été visualisées au niveau des bourgeons viraux et des cofacteurs d’actine ont été impliqués dans la production virale. Nos travaux antérieurs ont montré que la voie IRSp53/Wave2/Arp2/3 médiée par Rac1, est impliquée dans l’assemblage et le relargage des particules virales. Dans ce projet nous étudions le rôle du complexe de l’actine branchée, Arp2/3, dans l’assemblage du VIH-1 dans les lymphocytes T infectés. Pour se faire, nous infectons les cellules T (lignées ou primaires), avec le VIH-1. Après l’infection, les cellules sont traitées avec des inhibiteurs des petites RhoGTPases ou de la polymérisation de l’actine qui régulent ce complexe. Les résultats indiquent que CDC42 et Rac1 via IRSp53 sont impliquées dans la production des particules virales. Afin d’étudier le rôle du complexe Arp2/3 sur cette production on utilise des drogues.

Nous observons que l’inhibition de la polymérisation de l’actine filamenteuse ou la stabilisation anormale des filaments réduisent la production virale, indiquant un rôle fonctionnel de la dynamique de l’actine dans le VIH-1. Remarquablement, l’inhibition de l’actine branchée par la drogue CK666 ou par ARN interférent ciblant Arp2/3, montre une augmentation des particules du VIH-1 libérées par les cellules T infectées. Ces résultats suggèrent que le débranchement de l’actine via Arp2 /3 favorise un régime optimal au bourgeonnement viral dans les lymphocytes T hôte du VIH-1. La microscopie de super résolution révèle que la densité des plates-formes d’assemblage viral à la surface des lymphocytes T infectés augmente lors du traitement par CK666 avec une diminution de leur taille. Cela suggère que le débranchement du réseau d’actine branchée affecte l’assemblage du VIH-1. Nous étudierons ensuite la corrélation entre VIH-1 Gag et actine-F, avec et sans CK666, à l’échelle virus unique, la morphologie du virus par microscopie électronique, la variation d’accrochage de Gag aux membranes et la cinétique d’assemblage dans la cellule cible infectée par le VIH-1. Ces résultats nous permettront de comprendre le rôle de l’actine corticale dans l’assemblage et la production du VIH-1.